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热启动Taq酶抗体助力新冠核酸诊断

发布者:日期:2020-12-19 返回上一级

突如其来的新型冠状病毒(2019-nCoV)席卷全球,在这场抗击疫情的战斗中,分子诊断技术成为人类手中最有力的武器,为新冠病毒的检测贡献巨大力量。PCR作为分子诊断的基础和核心技术,其结果的准确性极大的依赖于检测试剂盒的质量,而试剂盒的核心原料之一——热启动DNA聚合酶,重要性不言而喻。


热启动DNA聚合酶,顾名思义,需要加热才能发挥活力。相比于常规DNA聚合酶,热启动DNA聚合酶经过一定的修饰,一般在95℃加热5-10分钟活性中心才会暴露,这样就能有效避免低温下的模板错配,避免引物二聚体或非特异扩增的产生,大大提高了反应的特异性,从而实现精准检测。抗体修饰热启动DNA聚合酶,由于其封闭效果最佳,酶活释放速度快,是目前IVD市场上应用最多的DNA聚合酶热启动改造方法。


工作原理

由奥科博泰研发的热启动Taq酶抗体可以在低温时,与酶结合,封闭其活性;在PCR预变性95℃加热时,抗体变性,释放DNA聚合酶,酶活性被启动,完成扩增反应。

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检测数据


01

 利用标准酶活测试实验验证抗体封闭效果

50℃直接扩增T2发夹型寡核苷酸,抗体与酶结合,酶活性被封闭,荧光值未有显著上升,与负对照趋势一致;施加95℃变性步骤后再进行50℃扩增,抗体失活,酶活性被启动,荧光值显著上升,与阳性对照趋势一致。显示该抗体封闭效果较好(如下图)。

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02

利用单链DNA孵育实验验证抗体封闭效果

50℃直接扩增单链DNA(M3噬菌体),抗体与酶结合,酶活性被封闭,故没有新条带产生,与未添加Taq酶的反应体系情况一致;施加95℃变性步骤后再进行50℃扩增,抗体失活,酶活性被启动,PCR顺利进行,产生新的条带,与普通Taq酶扩增情况一致。显示该抗体封闭效果较好(如下图)。

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结论

通过以上实验数据可以看出,由奥科博泰研发的热启动Taq酶抗体,表现了其突出的“低温封闭,高温释放”的能力。DNA聚合酶和整个PCR反应过程对其 “呼之则来挥之则去”,在需要结合的时候抱紧,在需要释放的时候放手,极大地提高了检测的特异性和效率,是分子诊断原料优秀的助力产品,欢迎各试剂厂家索样询价。

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